ELISA komplekt põhineb antigeeni või antikeha tahkel faasil ja antigeeni või antikeha ensüümmärgistusel. Tahke kandja pinnaga seotud antigeen või antikeha säilitab endiselt oma immunoloogilise aktiivsuse ja ensüümiga märgistatud antigeen või antikeha säilitab nii oma immunoloogilise aktiivsuse kui ka ensüümi aktiivsuse. Määramise ajal reageerib uuritav proov (milles mõõdetakse antikeha või antigeeni) tahke kandja pinnal oleva antigeeni või antikehaga. Tahkel kandjal moodustunud antigeen-antikeha kompleks eraldatakse teistest vedelikus leiduvatest ainetest pesemise teel.
Lisatakse ensüümiga märgistatud antigeene või antikehi, mis samuti seostuvad reaktsiooni teel tahke kandjaga. Sel ajal on ensüümi kogus tahkes faasis võrdeline aine kogusega proovis. Pärast ensüümreaktsiooni substraadi lisamist katalüüsib ensüüm substraati värvilisteks toodeteks. Toote kogus on otseselt seotud uuritava aine kogusega proovis, seega saab vastavalt värvi sügavusele läbi viia kvalitatiivse või kvantitatiivse analüüsi.
Ensüümide kõrge katalüütiline efektiivsus võimendab kaudselt immuunvastuse tulemusi, muutes analüüsi väga tundlikuks. ELISA-d saab kasutada antigeenide määramiseks, kuid seda saab kasutada ka antikehade määramiseks.
ELISA komplekti põhiprintsiibid
See kasutab antigeeni ja antikeha spetsiifilist reaktsiooni objekti ühendamiseks ensüümiga ning seejärel tekitab kvantitatiivseks määramiseks värvireaktsiooni ensüümi ja substraadi vahel. Mõõtmisobjektiks võib olla antikeha või antigeen.
Selle määramismeetodi jaoks on vaja kolme reaktiivi:
â Tahkefaasi antigeen või antikeha (immuunadsorbent)
â¡ Ensüümiga märgistatud antigeen või antikeha (marker)
⢠ensüümi toime substraat (värvi arendav aine)
Mõõtmisel seotakse antigeen (antikeha) esmalt tahke kandjaga, kuid säilitab siiski oma immuunaktiivsuse ning seejärel lisatakse antikeha (antigeeni) ja ensüümi konjugaat (marker), mis säilitab endiselt oma esialgse immuunaktiivsuse ja ensüümi. tegevust. Kui konjugaat reageerib tahkel kandjal oleva antigeeniga (antikehaga), lisatakse vastav ensüümi substraat. See tähendab, katalüütiline hüdrolüüs või REDOX reaktsioon ja värvus.
Selle tekitatav värvitoon on võrdeline mõõdetava antigeeni (antikeha) kogusega. Seda värvilist toodet saab jälgida palja silmaga, optilise mikroskoobi, elektronmikroskoobiga, mõõta ka spektrofotomeetriga (ensüümi märgistusseade). Meetod on lihtne, mugav, kiire ja spetsiifiline.